SISTEMA DE PRODUCCION INVITRO DE EMBRIONES

Las técnicas para producir embriones bovinos, en estadios de preimplantación mediante la maduración de ovocitos y su posterior fertilización in vitro, ofrece la posibilidad de obtener embriones a bajo costo para ser utilizados con fines de estudio (desarrollo embrionario temprano, transgénesis, clonación) o con propósitos comerciales. Las condiciones de cultivo in vitro pueden influenciar significativamente el desarrollo embrionario, determinando cambios responsables de su menor calidad, comparados con los embriones producidos in vivo . En particular, la adición de suero a los medios de cultivo altera tanto la morfología embrionaria como su calidad, y su eliminación posibilitaría producir embriones de buena calidad para ser criopreservados y transferidos. Los objetivos de esta revisión son describir los aspectos generales del cultivo in vitro de embriones y resumir algunas hipótesis referidas a los mecanismos por los cuales el suero podría alterar el desarrollo y la calidad embrionaria.

El proceso de producción in vitro de embriones bovinos puede dividirse en tres pasos fundamentales, los cuales, independientemente del protocolo utilizado, en orden cronológico son: Maduración de ovocitos, Fecundación de ovocitos maduros, Cultivo de embriones.

Estos tres pasos, comprenden una compleja serie de procesos fisiológicos, muchos de los cuales son aún desconocidos, condicionando cada uno per se el éxito o el fracaso del siguiente. Luego de la maduración in vitro, aproximadamente el 90% de los ovocitos inmaduros puestos a cultivar, alcanzan la metafase II y expulsan el primer cuerpo polar entre las 16 y 24 hs de comenzada la maduración. De estos, aproximadamente el 80% es fecundado y comienzan a dividirse, al menos, hasta el estadio de 2 a 4 células. Sin embargo, sólo un 25-40% alcanza el estadio de blastocisto (B) o blastocisto expandido (Bex) luego del cultivo durante 6-7 días. Esto indica que el cultivo embrionario, correspondiente al paso más prolongado dentro del proceso de producción in vitro, es el período en el que se establece el mayor porcentajes de pérdidas del sistema. A su vez, durante esta etapa, se define en gran medida la calidad de los embriones obtenidos

EQUIPO PARA LA INSEMINACION ARTIFICIAL

Para poder realizar la IA, es necesario contar con el siguiente material:

Termo de nitrógeno. El termo de nitrógeno funciona como refrigerador (-196°C), y gracias al nitrógeno liquido, en el se guardan las dosis de semen.

Dosis de semen. Estas se encuentran almacenadas en el termo, y vienen en diferente presentación, las más comunes son las pajillas de q.5 mI y la ampolleta de 1 Ml.

Caja para el instrumental. Es importante que el material para la lA se almacene por separado y además para evitar polvo o suciedad, que es muy frecuente en los establos o ranchos.

Pinzas. De preferencia las pinzas deberían ser un poco más largas, para poder manejar el semen los más abajo posible del cuello del termo.

Termo para descongelacion: Para una mejor descongelación a temperatura de 37°C, se venden termos de descongelación que se autorregulan para que el agua en su interior no suba o baje de temperatura.

Termómetro. Al utilizar la descongelación en agua a 37°C es necesario medir la temperatura y para esto se utiliza el termómetro.

Cortador de pajillas o ampolletas. Para cortar las pajillas se venden instrumentos diseñados para tal fin; sin embargo, las pajillas se pueden cortar con tijera o navaja, siempre y cuando se realice de la forma adecuada. Para cortar la ampolleta es necesario contar con un cortador para vidrio, pero en su mayoría, las ampolletas vienen marcadas para que con tan solo con poca presión lateral se rompan.

Guantes de plástico: los guantes para palpaciones se pueden encontrar en diferentes modelos y tienen la finalidad de proteger la mano del operador al momento de realizar la palpación para la inseminación.

Pitola para inseminacion o pipeta: es adecuada para la aplicación del semen dentro de la hembra, se pueden utilizar diferentes aplicadores, siendo las mas comunes la pipeta rígida y la pistola de inseminación la cual puede ser de tipo universal o fija.

Fundas: estas se utilizan para la pistola de inseminación (o pipeta) fija o universal. Existen fundas verdes para la aplicación de las pajillas y fundas azules para la aplicación de las ampolletas.

Jeringas: estas se utilizan con las pipetas convencionales.

Libro de registro: la libreta de registro forma parte importante del proceso de IA, ya que en ella se debe de llevar el record de todas las inseminaciones. Asimismo es necesario contar con cubetas, solución yodatada, toallas de papel, etc. y cualquier otro material que pueda facilitar el trabajo de la inseminación.

TECNICAS DE INSEMINACON ARTIFICIAL

* Póngase el guante de plástico y lubrique la manga con agua.
* Tome toallas de papel.
* Acérquese a la vaca despacio. Hágale saber que usted está allí. Sea tan cuidadoso como pueda.

No golpee, abuse o excite a la vaca, o haga algún ruido innecesario
* Utilizando la toalla sujete la cola.
* Después de haber limpiado el recto de cualquier exceso de excremento, con cuidado limpie la vulva y los labios de la misma con una toalla de papel. Esto debe de hacerse con suavidad. Tenga cuidado para que ni excremento ni residuos sean forzados al interior de la vulva. Vigile que los bordes de las toallas no irriten o rasguñen.
* Inserte la pistola francesa al tracto reproductivo.

Los labios de la vulva pueden ser abiertos ligeramente para permitir una inserción limpia de la pistola. Esto puede hacerse aplicando una ligera presión hacia abajo y hacia atrás con la palma de la mano y la muñeca en el recto, justo dentro de la apertura.
La pistola debe de ser introducida a la vagina lo más lejos posible sin que toque los labios de la vulva. Esto puede hacerse si la vulva está perfectamente limpia y se sigue el procedimiento arriba indicado.

El paso de la pistola por la vagina debe ser lo más suave posible. Los primeros centímetros la pistola debe de estar ligeramente dirigida hacia arriba con el objeto de no introducirla dentro de la vejiga, luego nivele la pistola en lo que resta del pasaje hasta el cérvix o cuello del útero.
A medida que la pistola es pasada por la vagina, mueva la mano izquierda que está dentro del recto hacia adelante. Esto debe de hacerse en forma simultánea.
Cuando la pistola francesa se detenga, la punta de la pistola debe de haber llegado al cuello del útero.

Deposite el semen lentamente para asegurar que todo el semen salga de la pistola francesa.
* No realice la inseminación con prisa. Esta es una actividad en la que no queremos correr. Es un paso crítico e importante.
* Retire la pistola francesa y la mano con el mismo cuidado con el que entró.
* Doble con cuidado la punta de la funda con la mano enguantada y desatornille el émbolo de la pistola. Coloque la pistola francesa nuevamente en su camisa. Mientras todavía se encuentra sujetando la funda quítese el guante. Dentro de guante debe de permanecer la funda.
* El guante y la funda pueden ser incinerados.

ANATOMIA DE LA HEMBRA BOVINA

El sistema re productor de la hembra bovina está constituido por los órganos internos y extremos. Los primeros incluyen el ovario (conocido como la glándula sexual femenina) y al sistema de conductos formados por el oviducto, útero, cerviz y vagina y los segundos están representados por el vestíbulo vaginal y la vulva.

Vulva: la vulva es la parte más extrema y esta formada por los labios vulgares derecho e izquierdo, los cuales miden aproximadamente 12 cm. de longitud. De la vulva se encuentra el vestíbulo vaginal, el cual esta en conexión directa con la vagina y el vestíbulo esta marcado por el orificio uretra el cual representa el primer obstáculo a la inseminación artificial, ya que el catéter o pipeta de lA puede ser introducido en dicho orificio. En la comisura ventral "de la vulva se encuentra el clítoris, el cual es el homólogo del pene.

Vagina La vagina mide entre 25 y 30 cm. de longitud y se inicia inmediatamente después del vestíbulo. La vagina desempeña varias funciones en la reproducción, siendo las más importantes la de servir de receptáculo natural del semen depositado por el toro en la monta natural y como vía de salida del feto durante el parto.

Cuello uterino o cervix. El cuello uterino forma parte del útero y es una estructura de tipo cilíndrica con bordes transversales o espirales alternados, llamados anillos (generalmente son tres), los cuales representan el segundo obstáculo para la lA. El cervix mide de 8 a 10 cm. Y entre sus principales funciones están las de facilitar el transporte de los espermatozoides hacia la luz del útero mediante la producción de moco, actúa como reservorio de espermatozoides y durante el celo, la musculatura lisa del cervix se relaja bajo la influencia de estrógenos posibilitando la apertura del canal cervical lo cual facilita la IA. En contraste con esto, durante la gestación y el diestro conducto cervical queda sellado por un moco viscoso que actúa como barrera contra el transporte de esperma y la invasión de bacterias.

Útero: el útero de la vaca es de tipo bicornual, es decir, que cuenta con un cuerpo uterino pequeño que mide de 2-4 cm. y dos cuernos uterinos que miden de 35-45 cm. de longitud. En su trayectoria, los cuernos se curvan hacia atrás y hacia arriba. Entre las funciones que desempeña el útero se pueden mencionar las siguientes:

1) sirve como sitio de transporte para los espermatozoides hacia el sitio de fecundación.
2) Regula la vida del cuerpo lúteo a través de la producción de prostaglandina.
3) Permite el desarrollo del producto durante la gestación y la expulsió durante el parto.

La primera parte del cuerpo uterino, así como la última parte del cervix es 10 que se conoce como blanco del inseminador.

Oviductos: Inmediatamente después de los cuernos uterinos inician los oviductos, los cuales son los encargados de transportar tanto a los espermatozoides como a los óvulos. Los oviductos miden aproximadamente 25 cm. y se encuentran divididos en forma funcional en tres segmentos.

Infundíbulo, que es el encargado de recibir al óvulo cuando éste es expulsado del ovario.cuando ocurre la ovulación. AMPULA (ampolla), es la parte media del oviducto y es el sitio en el que normalmente ocurre la fecundación y el ITSMO que es la parte que comunica con los cuernos uterinos y funciona como reservorio de espermatozoides.

Ovario: Los ovarios son quizá los órganos más importantes del aparto reproductor de la hembra, ya que en ellos se producen los óvulos (función exocrina) y las hormonas (función endocrina). El ovario mide aproximadamente de 2 a 4 cm. de largo por 1 a 2 cm. de ancho. En términos generales el ovario, como glándula sexual femenina es la encargada o responsable de organizar y dirigir toda la vida sexual de la hembra. En contraste con 10 que sucede en los testículos, los ovarios permanecen en la cavidad abdominal, en donde en condiciones normales liberan un óvulo cada 18-21 días. En los ovarios se pueden encontrar dos tipos de estructuras: los folículos en diversos grados de crecimiento y el cuerpo lúteo.

Los folículos contienen en su interior a los óvulos que por influencia de las hormonas gonadotrópicas (FSH y LH) crecen, maduran y posteriormente son expulsados (ovulación) hacia el infundíbulo. En el espacio que queda después de la ovulación, se forma primeramente un cuerpo hemorrágico, que posteriormente se transforma el cuerpo lúteo. Los folículos secretan los estrógenos que son de cierta forma los responsables de la conducta sexual durante el estro (celo o calor) y el cuerpo lúteo secreta progesterona que es la responsable de la inactividad sexual en todo lo que resta del ciclo y del mantenimiento de la gestación en caso de que esta haya tenido lugar después del servicio ya sea por monta natural o por lA.

Se ha mencionado la influencia que tienen las hormonas gonadotrópicas, en particular la LH (hormona luteinizante) y la FSH o (hormona folículo estimulante). Estas hormonas son producidas en la hipófisis anterior (parte anatómica del cerebro) y son indispensables para una adecuado funcionamiento de la actividad sexual, así como para la producción de células sexuales, óvulo s y espermatozoides, tanto en la hembra como en el macho, respectivamente.

La Pelvis: Aunque la pelvis no forma directamente parte de los órganos de la reproducción al menos en la vaca tienen la función de contener en su mayor parte a los órganos reproductivos (esto puede variar dependiendo de la edad y el número de parto de la vaca), así también representa una formación anatómica importante durante el parto, por esto es de gran importancia conocer la anatomía de la pelvis de los animales domésticos y en nuestro caso el de la vaca.

La pelvis desde el punto de vista anatómico, se encuentra formada por dos huesos simétricos llamados huesos pelvianos o coxales (coxal derecho e izquierdo) y por el hueso sacro.
Los coxales se unen en su línea media en la base de la pelvis formando así la sínfisis púbica que es donde descansan los órganos reproductivos (principalmente se observa en novillas o en vacas jóvenes no gestantes), en caso de ser vacas muy viejas o gestantes, solamente se encuentra contenido el cervix.

En la parte dorsal de la pelvis, los coxales no se unen sino que dejan un espacio donde se articula el hueso sacro, formando así el techo de la cavidad pelviana. El sacro, por delante, se une a la columna vertebral (vértebras lumbares) y por atrás a las vértebras coccígeas (parte que conforma la cola).

TODO ENCAMINADO A UN PROPOSITO